1.伴t(8;21)(q22;q22)急性髓系白血病微小残留病监测及意义2.K562细胞中HtrA2对WT1的调控意义及机制探讨

【摘要】研究目的：分析急性髓系白血病伴t(8；21)(q22；q22)患者初诊、治疗及随访过程中融合基因AML1/ET0定性及定量监测的变化规律及预后意义。研究方法：总结分析52例急性髓系白血病伴t(8；21)(q22；q22)患者初诊、治疗及随访过程中融合基因AML1/ETO定性检测(32例)转阴情况及定量检测(20例)表达水平变化规律；统计分析融合基因转阴情况及表达变化趋势与患者复发及生存情况的关系。结果：32例AML伴t(8；21)(q22；q22)患者在各时间点/区间(完全缓解,即CR时,CR后0-3月,3-6月,6-12月,12-18月,18-24月,>24月)融合基因AML1/ETO转阴率分别为20%,46.88%,71.88%,71.88%,72.41%,95.45%,100%。不同时间点融合基因阳性/阴性组患者复发情况：CR时(复发例数/总例数)为3/20vs.3/5,P=0.07；CR后0-3月为3/17vs.3/15,P=1.0;CR后3-6月为2/9vs.4/23,P=I.0；CR后6-12月为5/9vs.1/23,P=0.003;CR后12-18月为5/8vs.0/21,P=0.000；CR后18-24月为0/1vs.0/21;CR后>24月时17例均阴性,0/17。生存分析显示：CR时、CR后6-12月、12-18月融合基因定性结果与生存相关,3年无复发生存(RFS)分别为85%vs40%,P=0.037;44.4%vs95.5%,P=0.000;37.5%vs100%,P=0.000；3年总生存(OS)分别为81.4%vs40%,P=0.018;25%vs95.7%P=0.001;20%vs100%P=0.000。融合基因定量分析显示,初诊时患者融合基因拷贝数与复发无关。CR时融合基因下降程度(<2对数级和≥12对数级)与RFS相关,1年RFS为40%vs100%,P=0.02。CR后3个月,5/6个月时融合基因拷贝数与复发相关：CR后3个月时,复发组vs.无复发组拷贝数分别为300vs10.5拷贝/104ABL基因,P=0.039；在CR后5/6个月时,两组中位拷贝数分别为2161vs12拷贝/104ABL基因,P=0.004。缓解后治疗过程中融合基因定量的升高(≥0.5对数级)同样影响RFS,1年RFS分别为58.3%vs100%,P=0.017。结论：融合基因AML1/ETO定性、定量监测均可预示患者预后。CR后6个月后融合基因转阴性的患者长生存的几率较大；CR时融合基因定量下降幅度大、监测过程中持续低水平的患者长生存的机会较大。研究目的：以K562细胞为对象,研究HtrA家族成员HtrA2对WT1蛋白的调控关系及其对K562细胞系生物学功能的影响,及相关机制探讨。研究方法：采用实时定量PCR及WesternBlot方法,检测药物和HtrA2抑制剂(UCF-101)处理细胞后WT1、HtrA2等在：mRNA及蛋白水平的表达变化；应用MTT法测细胞经药物和UCF-101处理后增殖能力的改变,统计分析增殖倍率；AnnexinV及PI标记细胞,流式细胞仪分析药物和UCF-101处理后细胞的凋亡情况；Westernblot方法检测药物和UCF-101处理细胞后相关信号通路蛋白的表达改变。RQ-PCR及WesternBlot方法分析不同疾病状态的慢性粒细胞白血病(CML)患者WT1、HtrA2的表达情况。结果：伊马替尼处理K562细胞,能够在转录水平上激活HtrA2基因使其表达上调,同时下调WT1基因的表达；UCF-101抑制HtrA2功能后,下调的WT1基因表达水平逐渐恢复。在蛋白水平,伊马替尼与高三尖杉酯碱(HHT)均能够诱导HtrA2蛋白上调(HHT作用较弱)；同时伊马替尼显著下调WT1蛋白水平,UCF-101抑制HtrA2功能后,WT1蛋白水平一过性下调后呈现明显上调趋势。细胞功能研究显示,HtrA2抑制剂引起的WT1蛋白水平升高能够减少伊马替尼(P<0.05)和HHT诱导的K562细胞凋亡,但对药物产生的增殖抑制无明显改变。信号途径研究结果表明,伊马替尼和HHT能够激活K562细胞中p-38MAPK途径,HtrA2抑制剂可以抑制药物对p-38MAPK途径的激活。伊马替尼显著而持久的抑制了erk1/2途径,但UCF-101对其抑制无明显影响。对CML患者原代细胞的研究显示,WT1基因表达在慢性期初诊患者中较高,完全细胞遗传学缓解(CCyR)患者较低,而急变/加速期患者升高；HtrA2基因表达则呈现相反趋势。两例CML患者酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗前后配对标本均显示WT1蛋白水平下调,而同时HtrA2蛋白上调,与K562细胞经药物处理前后的变化趋势一致。结论：K562细胞中存在HtrA2对WT1的调控作用。HtrA2对WT1的调控能够影响K562细胞的凋亡。HtrA2对WT1的调控间接影响p-38MAPK信号途径发挥生物学效应。
【作者】张丽霞；
【导师】秘营昌；
【作者基本信息】北京协和医学院，内科学，2014，博士
【关键词】微小残留病；急性髓系白血病；t(8；21)(q22；q22)；AML1/ETO；PCR；HtrA2；WT1；伊马替尼；MAPK信号途径；CML；

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